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哺乳动物的组织匀浆实验

发布时间:2019-08-02 录入:365bet官网平台网址 点击:
方法点:?所有操作都是0吗?
它是在4°C完成的。
去除1个动物组织后,切除脂质和结缔组织,然后置于预冷的匀浆缓冲液A中。
2用切刀将清洁过的布块切成小块(如1平方厘米),或将纸巾放入绞肉机中两次。
在韦尔奇搅拌机中很容易破坏肝脏,大脑,肾脏和心脏等组织,但由于骨骼肌和肺很困难,因此需要在均质化之前用家用绞肉机将其打破。
许多纤维化组织,例如哺乳动物胸腺,必须在均质化之前冷冻以促进破裂(通常与Ultra-Turrex匀浆器一起使用)。
培养的哺乳动物细胞和少量软组织(1?
5g)可以使用手动Dunce匀浆器(Dignam,1990)以及脑进行均质化。
在所有情况下,将均化器和玻璃容器预冷至4℃,并且均质化操作必须在冷室中进行。
你想添加3个组织到3吗?
然后,将4体积的均质化缓冲液B转移到均化器中。
以下列方式制备匀浆。
Potter-Elvehjem均质器:设备是否设置为500?
将组织均匀化几次,1500转/分钟,每分钟5次。
10秒
舞蹈手动均质器:均质组织10?
20次
桂林搅拌机:组织均质化3?
4次,每次20次
30s,间隔10?
将15%5匀浆倒入玻璃烧杯中,将玻璃置于冰上并在4℃下轻轻摇动匀浆30。
60分钟完全提取蛋白质。
实验建议:均质化时不要起泡。
您是否在6400°C下离心10 10000 g?
20分钟后,除去匀浆中的细胞碎片和其他物质。
7用2层纱布过滤漏斗(或加一层玻璃棉),过滤上清液,除去浮在表面的任何脂质。
小心旋转纱布,以获得最大量的滤液(称为“原始提取物”)。
使用分离方法和适当的分析方法尽快处理样品。


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